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美国**BTX是专业的细胞融合、电穿孔仪的生产厂家。ECM 630电穿孔仪在转基因的应用领域中得以广泛的应用,其无以伦比的高性能得到了全球同行的厚爱。BTX的系列产品适用于动植物、细菌、酵母、哺乳动物、人类细胞(包括活体细胞)的转基因等操作,操作方法可参照相关文献,及向厂商索要。ECM 630电穿孔仪是多才多艺型细胞转基因仪,适应于各类细胞.
ECM 630电穿孔仪应用举例:
10-500V电压:适用于哺乳动物细胞,植物细胞
50-2500V电压:适用于细菌、酵母各种型号,均有多种脉冲选择
•细菌/酵母转化(系统:ECM399/630)
电穿孔现在被认作是转化细菌及酵母的***的方法。革兰氏阴性细菌(例如大肠杆菌)一般比革兰氏阳性细菌更容易转化,因为他们的细胞壁组成不同。对于革兰氏阴性细菌常常可以获得10的10次方转化2/微克DNA的转化效率,而对于革兰氏阳性细菌,一般可以得到10的6次方转化2/微克DNA。Chang等人(1997)成功对一个mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株进行电穿孔以传递mtz抵抗性。Planelles等人(1999)使用电穿孔转化大肠杆菌,以避免使用包装物质。*近电穿孔仪器方面的进展将使研究人员能够进一步优化细菌转化(例如脉冲长度产生方面扩展的功能条件)。
RNA、DNA、蛋白质以及小分子都已经通过电穿孔的方法转入酵母。没有必要在电穿孔前部分去除酵母细胞壁,因为在完整酵母电穿孔方面的进展可以产生高的转化率。Faber等人(1994)年优化了S.Cerevisiae的实验方案,使用HansenulaPolymorpha获得了比以前的报告增加300倍的转化效率。
在质粒修复中,质粒从酵母转入大肠杆菌以进行详细的DNA序列分析,这是另外一种重要的技术。这种两个步骤的过程被电穿孔进行了简化,用于验证隐性基因的结构,将其导入酵母,看基因性和表现性之间的关系。已经建立了标准的实验方案使用指数衰减波发生器例如BTXECM630转化细菌/酵母。使用方形波电穿孔仪的实验方案,例如BTXECM830,来转化细菌/酵母。研究人员还成功将大的质粒(BAC及YAC)导入细菌。电穿孔杯是细胞及酵母电穿孔的*常用附件,而Model747共轴电极使用则变得越来越普遍。
•动物细胞转染(系统:ECM630/830)
对真核细胞的转染可以通过多种方法获得,例如磷酸钙沉淀、脂质体转染、病毒方法以及电穿孔。电穿孔已经被正式对传统的转染方法不灵的细胞有很好的效果,因此被选为**的分子传递系统。电穿孔的好处有可重复性、更高的效率、大量样本处理、无毒性以及容易使用(不需要孵育时间)。
Lofin等人(1999)对NIH/3T3细胞进行电穿孔使mRNA进入,以研究细胞周期及细胞分化过程中mRNA对基因表达调节、控制。Bodwell等人(1999)在对COS-7细胞进行电穿孔是使用较长的脉冲时间后获得了较高水平的表达。Warner等人(1997)使用电穿孔方法成功转化了淋巴细胞。IncyteGenomics公司成功使用BTX电穿孔仪转染了ES细胞进行转基因小鼠的生产。BTXECM399\630\830型仪器、电穿孔杯以及多种特用的电极都用于动物细胞转染用途。
•蛋白质电整合/电插入(系统:ECM630/830)
将蛋白质导入细胞以及将蛋白质插入至细胞膜中也可以通过电穿孔来实现。不光肽段,而且包括抗体的多种蛋白,也可以进行导入。Ushio-Fukai等人(1998)对电穿孔插入哺乳动物细胞中的外源蛋白进行了定量。对于这些用途可以使用多种BTX电极。
•植物细胞转化(系统:ECM630/830)
对植物原生质(玉米、烟草等)及完整植物的电穿孔可以用于产生对农业/园艺有用的转基因作物。植物细胞转化的一个主要目的是对植物细胞进行稳定转化以产生具有优良品质及产量增加的作物。Lin等人(1997)优化了多种植物上用于GUS表达的电穿孔条件,结果显示完整植物细胞以及原生质都可以进行有效转化。Diaz等人(1994)针对小麦及燕麦的叶和根的原生质进行了相似的优化试验,证明了电穿孔对于植物工作的有效性。这些作者也比较了电穿孔与PEG的差别,结果发现电穿孔更有效、更有重复性、更经济。BTX是世界上体内转染用特殊电极的**者。对于这些用途可以使用多种BTX电极,例如2针阵列、游标尺电极、以及Tweezertrodes。
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