编号：CPJS05279
篇名：纳米氧化锌致细胞凋亡的机制研究
作者：杨通旺 ;张博闻 ;吴涛 ;吴刚
关键词：靶向运输 纳米粒子 氧化应激 凋亡 自噬
机构： 包头医学院研究生学院,内蒙古包头014040
摘要： 目的研究氧化应激在纳米氧化锌引起的人非小细胞肺癌细胞（H1299）细胞自噬和凋亡之间的作用。方法实验分为实验组和对照组,对照组给予正常的培养基而实验组在培养基中分别给予2.5、10和25μg/ml（低,中,高剂量组）浓度的纳米氧化锌。向细胞中转染绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3（GFP-LC3）质粒,通过观察绿色荧光斑点确定自噬的发生。Western blotting检测LC3-Ⅱ来验证绿色荧光斑点确定的细胞自噬。钙黄绿素乙酰甲酯（calcein AM）和碘化丙啶（PI）染色来确定活细胞和晚期凋亡细胞。超氧化物阴离子荧光探针（DHE）染色检测细胞内活性氧（ROS）的聚集。应用动态光散射测定纳米氧化锌在培养基中的分散状态。结果对照组细胞有少量的DHE被氧化成红色,也出现了绿色荧光斑点的聚集,但没有细胞被PI染成红色。低剂量组被氧化的DHE开始增多,绿色荧光斑点开始增多,少量细胞被PI染成红色;中、高剂量组中大量DHE被氧化,绿色荧光斑点显著增多,大量细胞被PI染成红色。实验组纳米氧化锌在培养基中分散良好。结论纳米氧化锌在H1299细胞中引起了氧化应激,氧化应激诱发了细胞的自噬,细胞自噬功能的紊乱诱导了细胞的凋亡。
