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美Agena 核酸质谱分析系统 MassARRAY
---全球**核酸质谱高精度DNA定性定量分析平台
技术特点:
本系统的突出特点是以极高的精确度和极快的速度,一次性扫描384个样本中的多达40个SNP位点。首先进行多重PCR扩增,然后有经过修饰的ddNTP作单碱基引物延伸,使质谱能够准确识别碱基,并依据峰面积报告每个碱基的频率。因此能够准确分析样本中的等位基因分布频率,适用于遗传性疾病检测和体细胞突变检测以及鉴别一个体的正常或肿瘤组织。MassARRAY 反应体系不需要杂交,可避免杂交错配干扰,也不需要荧光标记。其采用的高密度SpectroCHIP 芯片能在8小时内完成3840个样本的多重SNP鉴定,全自动分析结果,不受人为因素干扰。访系统分为96孔和384孔2种不同通量和3种仪器型号供用户灵活选择,可满足用户低,中,高不同通量的使用需求。该系统的上市及时提供了从低到高不同规模的高效率和高质量检测SNP的技术平台,顺应了当前医学疾病基因组疾病机制研究和临床诊断检测迅猛发展的趋势。
技术原理
核酸质谱主要通过单碱基延伸和分子切割的两种生物化学技术实现。
iPLEX SNP 基因型分析
Assay Designer 软件对SNP的80-150bp区域设计多重PCR引物,并对SNP位点设计单碱基延伸引物。PCR扩增处理:5ul体系做1-40重反应,45个循环;产物经虾碱性磷酸酶(SAP)处理。单碱基延伸扩增不同长度的1-40条引物,用ddNTP作用碱基延伸,200个循环。DNA质谱检测和数据分析精确区分4种碱基的分子量,并自动报告其生物结果。
EpiTYPER DNA 甲基化分析
亚硫酸盐将未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,PCR扩增和SAP处理用反链5端带T7启动的引物扩增500bp, 产物经虾碱性磷酸酶(SAP)处理,体外转录将DNA转录为PRA, 碱基特异性酶切酶切T后, DNA 片段的分子量取决于亚硫酸盐处理后的碱基变化。
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