Biochrom30+氨基酸分析仪检测石斑鱼中水解氨基酸

摘要：

以石斑鱼为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明石斑鱼肌肉中氨基酸总量的质量百分比为17753.114mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的40.63%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.52%。

1. 样品前处理

2. 所用试剂

1. 浓盐酸，浓度≥36%,优级纯

2. 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

3. 水：去离子水

4. 苯酚：须重蒸

5. 17种氨基酸标准品

1. 前处理设备

2. 分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。

3. 水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

4. 匀浆机。

5. 无油真空泵

6. 干浴水解浓缩仪

7. 移液管

8. 0.22um滤膜

    

9. 样品制备（参考国标GB 5009.124-2016）

   原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。

    

10. 试样水解

    称取含蛋白7.5-25mg的试样，加入水解管中，加入15mL 6mol/L盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。 将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110°C水解22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°C吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。

     

11. 分析方法描述（Biochrom 30+）

    氨基酸分析仪分析方法参数：

12. 色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

13. 分离程序：

1. 运行时间：经分析时间+再生时间 57min

2. 反应单元温度：135°C。

3. 检测波长：570nm、440nm同时检测。

    

    

4. 样品中氨基酸含量的计算

      样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

   ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

   式中:

   ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

   Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

   As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

   cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。

    

   试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

   Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………(3)

   式中:

   Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

   ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

   F ———稀释倍数;

   V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

   M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

   m ———称样量,单位为克(g);

   10⁹ ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

   100 ———换算系数。

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

   附、石斑鱼分析图谱及做样结果

    

    

    

    

    

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